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HPLC泵的十个使用要点分析
点击次数:171 发布时间:2019-04-25
HPLC是在经典的液相色谱法基础上发展起来的,其以液体作为流动相,并采用颗粒极细的高效固定相的柱色谱分离技术。HPLC因其具有分离效能高、分析速度快、检测灵敏度好、能分析和分离高沸点且不能气化的热不稳定生理活性物质的特点而被广泛应用于生物化学、药物及临床分析,世界各国已将该法收载于药典。

HPLC有五大系统构成,其中,泵是HPLC的动力系统。液体,只有通过泵的转动而使之流动。因此掌握泵的使用要点对于正确使用HPLC有着至关重要的意义。

 

1、操作泵之前,用至少两个体积(标准脱气机30mL,对微脱气机10mL)冲洗真空脱气机,特别是当泵关闭了一段时间后(例如:过夜),以及在通道中使用挥发性混合溶剂时,防止溶剂瓶内的玻璃滤头(过滤器)堵塞及长菌,当滤头表面有黑色或黄色污染层说明发生了堵塞,应立即清洗或更换。

2、将装有溶剂瓶的溶剂箱放在泵上面或较高处。当在四元泵上使用盐溶液或有机溶剂时,建议将盐溶液接在下面的梯度阀口上,将有机溶剂接在上面的梯度阀口上,有机溶剂通道建议在水或盐溶液通道的正上面。建议用水定期冲洗所有MCGV通道除去可能在阀口析出的盐结晶。
 

3、定期检查排液阀的过滤白头。检查方法:拧开排液阀,以水作流动相。

对于标准脱气机(G1322A),流速5ml/min水,若压力大于10bar,则建议更换。 

对于微量脱气机(G1379A),流速2ml/min水,若压力大于5bar,则建议更换。


4、当使用低流速时,检查所有1/16英寸接头有无渗漏(用压力测试或漏液测试。每当更换泵密封垫时排液阀虑芯也应更换。


5、更换活塞密封垫时检查活塞杆上是否有划痕。有划痕的活塞将导致轻度渗漏,并降低密封垫的使用寿命。应尽早更换有划痕的活塞。


6、使用缓冲溶液时,关泵前先用水冲洗系统。当需要长时间使 用0.1摩尔或更高浓度的缓冲液时,建议选用密封垫清洗附件,以减少对密封垫及活塞杆的磨损。


7、如果使用了高浓度的缓冲盐,可以考虑用热水(50-60℃)来冲洗盐通道来确保没有缓冲盐残留在系统中。


8、更换活塞密封垫后应按照密封垫安装步骤对其进行磨合,但磨合不适用于正相密封垫。


9、当泵头安装有柱塞清洗附件时,由于该附件中也有密封垫,这样就会增加活塞杆运动时的阻力。所以开泵前一定要用10%异丙醇,并将其流速调至约2-3滴/分钟使溶液流过冲洗装置。(对于二元泵SL,如果不使用盐溶液可以不开)10%异丙醇有助于降低水的表面张力,并有抑菌作用。不要用其它溶剂代替。
 

10、当泵头安装有冲洗附件而不开启10%异丙醇,会使密封垫及活塞杆的寿命减短(二元泵SL除外),泵头如果发出“吱吱”声不影响使用和泵的精度如果有必要,可以改变压缩因子(compressibility)来达到更好的效果。


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